Исследуемый материал (гной, мокрота, испражнения, смывы со слизистой, Спинномозговая жидкость и др.) берут в соответствии с предполагаемым местом локализации возбудителя. В некоторых случаях при одном и том же заболевании исследуемый материал в разные периоды развивающейся инфекции берут разный, поскольку микроб меняет свое место нахождения (например, при брюшном тифе). В подавляющем большинстве исследуемый материал остается исходным, поскольку возбудитель не меняет место своей локализации.

Для ингибирования сопутствующей микрофлоры с учетом особенностей предполагаемого возбудителя инфекции исследуемый материал может быть подвергнут предварительной физической, химической или биологической обработке.

После этого делается посев в чашку Петри с плотной питательной средой таким образом, чтобы механически разобщить особи и получить изолированные колонии. В некоторых случаях методы, ингибирующие сопутствующую микрофлору, применяются сочетано, а в некоторых – последовательно. Наиболее широко применяемым методом получения чистой культуры является механический.

Материал засевают на питательную среду с учетом культуральных свойств выделя6емого возбудителя. Для посева используют простые, элективные, а в некоторых случаях и дифференциально – диагностические среды. Для получения изолированных колоний материал засевают на плотные питательные среды, позволяющие получить изолированные колонии. Но в некоторых случаях, когда в качестве исследуемого материала используется кровь, моча, спинномозговая жидкость, материал сразу засевают на жидкую питательную среду. После инкубации в термостате при оптимальной температуре из посева на жидкой питательной среде делают пересев в чашку Петри с соответствующей плотной питательной средой.

Чашки с посевом выдерживают в термостате при 37 градусах в подавляющем большинстве случаев 24 часа (в зависимости от скорости размножения микробных клеток и накопления их массы продолжительность экспозиции посевов в термостате может быть изменена).

Вынутые из термостата посевы подвергаются исследованию:
а) производится макроскопическое исследование выросших колоний. При этом необходимо обратить внимание на частоту встречаемости однотипных колоний. Это могут быть колонии возбудителя заболевания;
б) производится микроскопическое исследование подозрительных колоний;
в) изучается при помощи серологической реакции (микроагглютинации) антигенная структура исследуемого микроба. На основании данных по пунктам «а, б, в» делается предварительное заключение в отношении видовой принадлежности изучаемого микроба.

Для окончательного вывода необходимо изучить дополнительные тесты. Для этого из оставшейся части исследуемой колонии или аналогичной колонии делается отсев в пробирку со скошенной питательной средой. Этот отсев дает возможность отделить изучаемый микроб от остальных и получить чистую культуру. Кроме того, отсев в пробирку дает возможность накопить чистую культуру в количестве особей, необходимом для изучения тестовых характеристик микроба.

Пробирку с отсеянным возбудителем помещают в термостат, выдерживая необходимый температурный и экспозиционный режим. После изъятия пробирки из термостата:
а) макроскопически определяют наличие роста культуры;
б) микроскопически проводится проверка чистоты выделенной культуры;
в) проводится проверка на активную подвижность микроба (если в этом есть смысл);
г) изучают антигенную структуру (ставят развернутую серологическую реакцию – реакцию агглютинацию, а в некоторых случаях – РСК);
д) для учета ферментов, определяющих видовую принадлежность микроба, производят посев на дифференциально – диагностические среды;
е) определяют факторы вирулентности ( in vivo на лабораторных животных, in vitro на специальных питательных средах);
ж) производят посев (дисковым или иным методом) для учета чувствительности микробных клеток к антибиотикам;
з) производят посев для учета чувствительности микробных клеток к дезинфицирующим веществам ( методом серийных разведений или дисковым).

Учет результатов по пунктам «г, д, е, ж» делается через 24 часа при выдерживании исследуемых тестов в термостате. По пункту «з» результат получают через 48 часов при выдерживании посевов в термостате.

На основании данных всех пунктов (от «а» до «з») выдается окончательное заключение – по пунктам «а – д» о видовой принадлежности возбудителя, по пункту «е» - о степени патогенности возбудителя. Результат по пункту «ж» позволяет рациональнее проводить антибиотикотерапию, а результат по пункту «з» - качественнее проводить дезинфекцию химическими веществами.

В начало страницы