Лабораторные исследования растительных организмов,
пораженных микроорганизмами
Диагностика растительных организмов, пораженных микробами, основанная на симптомах, должна сопровождаться лабораторным анализом, позволяющим выявить и идентифицировать этиологический фактор, вызвавший данное заболевание.
Основными методами лабораторной диагностики являются микроскопический и выделение чистой культуры возбудителя с последующей его идентификацией. При этом необходимо обладать определенными навыками взятия материала и приготовления микропрепаратов.
Выделение чистой культуры микорорганизмов осуществляется в соответствии с правилами работы в микробиологической лаборатории, получения чистой культуры и использования методов и методик в соответствии с характеристикой предполагаемого возбудителя.
С цель. Микроскопического исследования пораженного органа растения готовят микроскопические препараты различными способами.
Для изготовления микропрепаратов необходимо иметь обезжирены предметные и покровные стекла, анаилиновые красители, капельницу со стерильной водопроводной водой или физиологическим раствором, скальпель, препаровальные иглы, пинцет, бритву, микроскоп.
Микропрепараты могут быть представлены тонкими срезами, мазками – отпечатками, соскобами из пораженных органов растений.
В зависимости от твердости исследуемой растительной ткани срезы делают бритвой или непосредственно из ткани или же кусочки ткани закладывают в мягкие зажимы и после этого бритвой делают тонкие срезы.
Полученные срезы помещают в каплю стерильной водопроводной среды на предметном стекле.
Препараты мазки – отпечатки готовят из пораженных тканей мягких стеблей, плодов, клубней, корнеплодов. Пораженный участок разрезается скальпелем и к влажной поверхности прикладывается чистое стекло. На стекле остается зеркальный отпечаток пораженной ткани.
Микропрепарат может быть приготовлен путем соскоба в том случае, если разрушенная микроорганизмами ткань поддается соскабливанию. Соскобленную скальпелем ткань равномерно распределяют тонким слоем в капле воды на предметном стекле.
При прижизненной окраске препаратов нередко применяют простой метод – использование одного анилинового красителя (часто используют водный раствор метиленовой сини). Для этого в каплю воды с исследуемым материалом на предметном стекле, вносится краситель и накрывается покровным стеклом.
Для высушенного на воздухе и фиксированного в пламени препарата применяются как простые, так и сложные методы окраски.
При простых методах окраски применяются различные анилиновые красители (диупсин, генцианвиолет, фуксин, метиленовая синь, бриллиантовая зелень и др.). При сложных методах окраски, позволяющих дифференцировать микроорганизмы, применяют окраску по методу Грама, Циль – Нильсену, по Бурри и др.
