Изучение морфологии и строения клеток микроорганизмов, величина которых измеряется в большинстве случаев микронами (1 микрон равняется 0,001 мм) или миллимикронами, возможно только с помощью специальных приборов – микроскопов, обеспечивающих увеличение исследуемых объектов в сотни (световые микроскопы) и десятки тысяч (электронные микроскопы) раз.

Изучение живых или убитых микроорганизмов возможно при помощи микроскопического метода. С этой целью готовятся микропрепараты.

Изучение микробов в живом состоянии дает возможность ознакомиться с их подвижностью, характером деления, образованием и прорастанием спор, отношением к химическим агентам.

С этой целью готовится препарат «висячей» или «раздавленной» капли. Способ приготовления этих микропрепаратов был разработан Кохом.

В препарате «висячая капля» взвесь живых микробных клеток рассматривают в жидкой питательной среде или в физиологическом растворе (0,85% раствор NaCl). При этом не следует готовить слишком густую взвесь микробов, т.к. это затруднит наблюдение за отдельными клетками.

Микропрепарат готовится следующим образом: на чистое обезжиренное покровное стеклышко наносится небольшая капля взвеси микробов. Края стеклышка смазываются вазелином (или каким либо другим подобным веществом) и после этого на него накладывается предметное стекло с углублением в середине таким образом, чтобы капля взвеси не касалась краев и дна лунки. Затем предметное стекло быстро переворачивается так, чтобы капля свободно свисала в лунке. Капля оказывается герметически заключенной во влажной камере. Если препарат не удастся закрыть герметически, то капля физиологического раствора начнет постепенно подсыхать. В высыхающей жидкости возникают токи, способствующие пассивному передвижению микроорганизмов, что может быть ошибочно оценено как произвольное движение микробной клетки.

Наблюдение за микробами во влажной герметически закрытой камере можно осуществлять длительное время – несколько часов, используя при этом фазово – контрастный микроскоп или микроскоп с темным полем зрения.

Для того чтобы можно было зафиксировать ту или иную стадию состояния микроба, снимают покровное стекло, препарат фиксируют, окрашивают и заключают в канадский бальзам (бальзам позволяет хранить микропрепарат неограниченное время).

При отсутствии стекла с лункой, для наблюдения за живыми клетками, можно готовить препарат «раздавленная капля», позволяющий также наблюдать живые клетки, но в более короткий промежуток времени.

При приготовлении препарата «раздавленная капля» микробная взвесь наносится бактериологической петлей на предметное стекло и накрывается покровным стеклышком. Края стеклышка можно также смазывать вазелином.

Для познавания особенностей микробов в живом состоянии (в процессе роста и развития микробных клеток) можно приготовить микропрепарат «мазок – отпечаток». Для этого на плотную питательную среду (отвечающую культуральным требованиям микроба) в чашке Петри делают посев. В зависимости от характера посева рост микробов будет наблюдаться в виде отдельных колоний или в виде сплошного газона. Чашки помещают в термостат и в динамике (в соответствии с планом исследования) готовят мазки – отпечатки. Для этого на выросшие колонии или газоны накладывают чистое покровное стекло, слегка надавливают на него пинцетом и сразу же вертикально снимают его, не сдвигая стекло в сторону. Полученный препарат отпечатком вниз помещают в каплю физиологического раствора, нанесенную на предметное стекло (получается вариант «раздавленной капли»), и рассматривают при помощи светового микроскопа.

Такой «отпечаток» можно получить и на предметном стекле, если касаться поверхности колоний предметным стеклом.

Эти препараты удобны для изучения естественного расположения клеток друг относительно друга (цепочка, беспорядочное, парное и т.д.), а также для исследования процессов спорообразования, расположения и формы спор и спороносцев. Отпечаток можно фиксировать и окрашивать.

В начало страницы