Приготовление фиксированных препаратов
из культур микробных клеток
Для выявления морфологических и структурных особенностей, количественного и видового учета микроорганизмов, проверки чистоты культуры и ряда других целей готовят фиксированные окрашенные препараты, которые могут храниться длительное время.
Приготовление фиксированных окрашенных препаратов включает несколько этапов: приготовление мазка, высушивание, фиксация и окрашивание.
На обезжиренное предметное стекло наносят маленькую каплю стерильной водопроводной воды или стерильного физиологического раствора и бактериологической петлей переносят в нее небольшое количество исследуемого материала. Полученную суспензию равномерно размазывают тонким слоем на площади 1 – 2 см петлей. Мазок должен быть тонким, чтобы клетки в нем располагались в один слой и он высыхал на воздухе тотчас же после приготовления. Мазок следует готовить легкими вращательными движениями, не прилагая усилий, чтобы не нарушить естественного расположения клеток и не повредить их (не оборвать жгутики, не порвать цепочки стрептобацилл, стрептококков и др.).
После высыхания микропрепарата (на воздухе или при легком подогреве) мазок обязательно должен быть подвергнут фиксации.
Фиксация препарата преследует несколько целей: убить микроорганизмы, т.е. сделать безопасным дальнейшее обращение с ними, обеспечить лучшее прилипание клеток к стеклу, сделать мазок более восприимчивым к окраске (убитые клетки окрашиваются лучше, чем живые). Самым распространенным способом фиксации является термическая обработка. Для этого препарат трижды проводят через наиболее горячую часть пламени горелки, держа предметное стекло мазком вверх. Не следует перегревать мазок, так как при этом могут произойти грубые изменения клеточных структур, а иногда и внешнего вида клеток (сморщивание и др.).
Для исследования тонкого строения клетки, прибегают к фиксации химическими веществами. В этом случае фиксирующую жидкость либо наливают на мазок, либо препарат на определенное время помещают в сосуд с фиксатором. Чаще всего в качестве жидких фиксаторов используют этиловый спирт (время фиксации 12 – 20 минут), метиловый спирт (время фиксации 3 – 5 минут), смесь Никифорова (смесь 1:1 этилового спирта и эфира, время фиксации 15 – 20 минут). Существуют и другие фиксаторы.
По окончании фиксации препарат отмывают от фиксатора, осторожно обливая его проточной водой.
